Abstract

P 189

Einfluss von Dexpanthenol auf die Regeneration humaner kornealer Epithelzellen in Monolayerkulturen

Hahne M., Reichl S.
Technische Universität Carolo-Wilhelmina zu Braunschweig, Institut für Pharmazeutische Technologie, Braunschweig

Ziel: Die Studie beschreibt Untersuchungen an Monolayerkulturen humaner cornealer Epithelzellen (HCE-T) als In-vitro-Modell zur Bestimmung zellregenerativer Effekte. Es wurde anhand zweier verschiedener Methoden der Einfluss von Dexpanthenol auf die Regeneration von HCE-T Zellen nach mechanischer Manipulation sowie nach partieller Schädigung mittels eines chemischen Detergens (Natriumdodecylsulfat-SDS) bestimmt.
Methode: Es wurden SV40 immortalisierte, in Ca-Panthothenat-freiem Medium kultivierte HCE-T Zellen verwendet. Diese wurden konfluent kultiviert und mittels eines Zellschabers die Zellen auf einer definierten Breite von 1200 µm abgeschabt. Anschließend wurde mit Medium, dem aufsteigende Konzentrationen an Dexpanthenol bis zu 0,1% zugesetzt waren, weiterkultiviert, der Wundverschluss über 24 Std. mikroskopisch verfolgt und ausgewertet. In einer weiteren Methode wurde die Regeneration über einen Zellviabilitäts-Test (CellTiter-Glo) bestimmt, der den ATP-Level der Zellen als Maß der metabolischen Aktivität erfasst. Hierzu wurden konfluente HCE-T Monolayer in 96er Wells für 1 Std. mit 0,013% SDS-haltigem Medium geschädigt und anschließend für weitere 48 Std. in dexpanthenolhaltigen Medien weiterkultiviert. Der Wiederanstieg des ATP-Gehaltes in den Zelllayern diente zur Beurteilung der Regeneration.
Ergebnisse: Überraschend zeigte sich mit beiden Methoden in Abwesenheit von Dexpanthenol die schnellste Regeneration und Wundheilung, eine deutlich Verlangsamte mit zunehmenden Konzentrationen. Während im dexpanthenolfreien Medium die Wunde nach 24 Stunden zu 60% regeneriert war, erfolgte mit 0,1% Dexpanthenol im selben Zeitraum eine Regeneration von lediglich 33%. Die Viabilität der Zelllayer (ATP-Level) sank ebenfalls bei ansteigenden Dexpanthenol-Konzentrationen. Konzentrationen ab 0,5% zeigten sogar zytotoxische Eigenschaften.
Schlussfolgerungen: Dexpanthenol scheint einen hemmenden Einfluss auf die Regeneration kornealer Epithelzellen in Monolayerkultur zu haben. Weitere Untersuchungen an mehrschichtigen Epithelkulturen sowie organotypischen Kornea-Konstrukten sollen den Einfluss von Dexpanthenol auf komplexere Strukturen zeigen.

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