Abstract

SO.04.07

Membran-assozierte Muzine und ihre Regulation durch Entzündungsmediatoren auf der Augenoberfläche

Kakkassery V.^1,2, Spurr-Michaud S.², Perez B.², Blalock T.², Gipson I. K.^2
1Zentrum für Augenheilkunde, Universitätsklinikum Essen, ²Schepens Eye Research Institute, Harvard Medical School, Boston

Ziel: Das membran-gebundene Muzin MUC16, Vertreter einer neu entdeckte Klasse an Proteoglykane des feuchten Epithels, ist in seiner Glykolysierung in Non-Sjögren's trockene Augen verändert. Ziel dieser Studie war die Untersuchung der Regulation von okulären membran-assozierten Muzinen (MAM) in der Transkription, Translation und ihrer Sezernierung durch in trockenen Augen vorkommenden Entzündungsmediatoren mittles einer kornealen epithelialen Zelllinie.
Methode: Humane korneale limbale epitheliale Zellen (HCLE) wurde bis zur Konfluenz kultiviert. Rezeptor-Message-RNA der Untersuchungsmediatoren wurde in HCLE mittels einer konventionellen Polymerase-Ketten-Reaktion (PCR) untersucht. Konfluente Zellen wurden für sieben Tage in einem serumhaltigen Medium differenziert und stratifiziert, um eine Muzinexpression zu gewährleisten. Nach Serumentzug für 24 Stunden wurden die Zellen mit Interleukin (IL)-1 alpha; -6 und -8, und mit dem Tumor-Nekrose-Faktor-alpha (TNF-alpha) für eine, sechs oder 24 Stunden inkubiert. Die MUC1- und MUC16-Gentranskription wurde mittels einer relativen quantitative Real-Time PCR und TaqMan Primer gemessen. Protein-Translation und -Sezernierung der MAMs wurden durch Immunoblot-Analysen von MUC1 und MUC16 in Zelllysaten und Kulturmedien dargestellt.
Ergebnisse: Message-RNA des IL 1 Rezeptors-I, des IL 6 Rezeptors, des Glycoprotein 130, des IL 8 Rezeptors-I und –II und des TNF- Rezeptors-I und -II konnten in HCLE nachgewiesen werden. Es zeigten sich in der Transkription und Translation von MUC1 und MUC16 nach IL-1 alpha, IL-6 IL-8 oder TNF-alpha Gabe in den HCLE keine signifikanten Veränderungen. Nach einer 24-stündigen Inkubation zeigte sich eine vermehrte Sezernierung von MUC1 durch IL-6, und eine vermehrte Sezernierung von MUC1 und MUC16 Protein durch TNF-alpha.
Schlussfolgerungen: Eine signifikant erhöhte Sezernierungsrate von MUC1 und MUC16 wird durch IL-6 und TNF-alpha in HCLE induziert. Diese Ergebnisse zeigen einen möglichen Mechanismus der mittels des H185-Epitops gemessenen Glykolisierung (MUC16) in Patienten mit trockenen Augen.

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